紫外分光光度计测试BSA浓度曲线

紫外分光光度计测量蛋白浓度常可用经典公式：
蛋白的浓度（mg/ml）=1.45A280-0.74A260

亦可同时读取一系列倍比稀释的已知蛋白含量的标准液的光密度值，做出标准曲线，后换算出浓度。

测试时需注意的是：

1）用于仪器调零的液体与待测样品一致，标准蛋白也要使用同样的溶液；

2）光密度值应该在0.1-0.8之间；

3）要求蛋白质溶液完全透明；

4）对含量很低的蛋白质溶液可使用215/225nm的波长测定；

5）使用蛋白质浓度范围为0.1-1.0mg/ml。

现以牛血清白蛋白（BSA）作为测试项目验证一下结果

配制浓度约为10mg/ml的BSA溶液，然后按一定倍数稀释，至最低浓度为0.017mg/ml，用紫外分光光度计测试这一系列的BSA溶液的吸光度，做出标准曲线。

通过光谱的扫描发现，其峰值不一定在280nm上，而是在276nm或者277nm，可能是与蛋白的性质或者质量有关，其中276nm处的浓度-吸光度对应如下：

BSA浓度(mg/ml)	平均吸光度
10.920	3.893
2.184	1.449
0.437	0.337
0.087	0.198
0.017	0.116

图一：在坐标上作图的效果：

图二：排除浓度最高的那一点(10.920mg/ml)后作图的效果：

综上看来，用紫外分光光度计测试牛血清白蛋白（BSA）的浓度，浓度太高曲线将逐渐平缓，而在0.02-2.0mg/ml浓度之间，基本能呈现出较好的线性。

这段范围应该可用作检测BSA的可靠的区间，和教科书式的说法差不多。