促进蛋白稳定的几个因素

1、小分子诸如甘油和蔗糖可以促进蛋白的稳定性，但是需要注意这些小分子对目的蛋白的活性是否有影响，例如蔗糖和PEG对转化酶有很好的稳定促溶作用，但是对溶菌酶却是一种变性剂。

2、盐离子可以明显提高蛋白的溶解性。在促进蛋白稳定上，常见的一些盐离子作用大小依次是(CH3)4 N > NH4 > K > Na > Mg > Ca > SO4 > Cl > NO3 > ClO4 > SCN。

3、高度稀释的蛋白样品通常是不稳定的，如果不能迅速浓缩，可以加入一些其他蛋白，比如BSA，来提高目的蛋白的稳定性。

4、不带电荷的氨基酸，如甘氨酸和丙氨酸，也可以作为蛋白的稳定剂使用，通常的工作浓度是20－500mM，常使用的还有GABA，TMAO。

5、一些底物、辅助因子或者竞争性抑制剂也可以提高目的蛋白的稳定性；因为它们可以促使蛋白采取一些更紧密的折叠形式，从而减少unfoled区域，避免聚集。

6、一些金属离子会使蛋白中的半胱氨酸氧化，导致聚集沉淀，因此，EDTA等一些螯合剂可以促进蛋白的稳定，而还原剂，比如巯基乙醇和DTT也可以防止蛋白被氧化（巯基乙醇的工作浓度一般为5－20mM，pH6.5和20摄氏度的条件下，巯基乙醇的半衰期是100小时，而pH8.5和20摄氏度的条件下，其半衰期降低到只有4个小时；DTT在低浓度，0.5－1mM的情况下是有效的还原剂，但是其浓度不应过高，因为浓度过高的DTT会变成蛋白的变性剂，而且在高盐条件下，DTT的溶解度下降，pH6.5和20摄氏度的条件下，DTT的半衰期是40小时，pH8.0和20摄氏度的条件下，下降到只有1.4小时）。