纯化水微生物限度检查

诊断试剂的生产都会涉及到纯化水的使用，对纯化水的监控也就是一件很普通的事情，纯化水检测包括最频繁的电导率、PH的每日监控和一定频率的化学检测等。这些在中国药典中都有详细说明，现只想说说纯化水微生物限度检查的那点小事。

方法原理:

薄膜过滤法

需要用品：

1、过滤系统：其中装载滤膜的部分需要高压灭菌（或装上滤膜后灭菌处理）。

2、滤膜：滤膜孔径应不大于0.45μm，直径一般为50mm。

3、培养基：玫瑰红钠培养基、营养琼脂培养基。

步骤：

1、 装待检品水样的容器、取样的吸管、镊子等用品均要灭好菌，取水点打开让水流动一段时间。后快速取水样到容器中。

2、 把东西带入微生物限度实验室，以下步骤尽量在无菌条件下操作。

3、 先用缓冲液（PH7.0氯化钠－蛋白胨缓冲液）对待检水样进行1：10 的稀释（10ml纯化水加90ml的缓冲液），后取10ml进行过滤，冲洗（用缓冲液50ml），冲洗量可按照验证方法的量，但不宜太多，主要是考虑避免滤膜上的微生物受损伤。

4、 视情况可做2~3个梯度的稀释浓度进行过滤，并每种培养基做双份测试，当时在深圳药检所学习时，做了三个梯度，每个梯度每种培养基做了两份，一个试样水就用掉了12张膜。

5、 纯化水微生物限度(微限)实验做三个梯度的理由，曾经有一个例子（药品）：曾经遇到过的一种情况，用1：10供试液倒平皿，可能会一个菌都不长，而1：100及1：1000却长很多，这主要是因为样品药物有抑菌的作用，在1：10的条件下抑菌性还很高而是细菌被抑制生长，而1：100、1：1000时被稀释，抑菌性减小，有利于细菌的生长，这也是实验要首先做验证的原因，虽然纯化水出现这种可能性是微乎其微，这么做应该算是一种严谨的态度吧。

6、 过滤后，将集菌面朝上，贴于培养基上，靠培养基对膜的渗透供养菌生长，使其在膜上凸起生长，利于计数。反之则细菌向培养基渗入生长，会变模糊。

7、 营养琼脂培养基置于30-35摄氏度培养3天，玫瑰红钠在23-28摄氏度培养3-5天，每天记录细菌生长情况。

8、 到时间后计数菌落数量，换算成每ML多少个菌落报告。一般合格的标准是纯化水小于100cfu/ml，超纯水不得检出。

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