基因芯片技术(三)

质控体系

质控体系即合成含有已知基因片段的DNA，通过对质控品的检测，可监控整个测试过程是否有效。

质控品包括阳性质控物（野生型核苷酸序列、突变型核苷酸序列）以及阴性对照等。

阳性质控物可以通过使用目的片段构建质粒的方法来大量生成。野生型质粒可以用正常人类基因组DNA进行扩增得到目的产物后，通过连接酶连接至载体上，再传化到感受态大肠杆菌中，大肠杆菌克隆繁殖，这样就可以通过细菌培养来产生大量的目的片段的质粒，从细菌中回收质粒，用于构建所需的质控品。

突变型由于在人群中分布较少，难以通过直接扩增得到，可以引入定点突变的方法，使用正常的人类基因组DNA构建突变型质粒。质粒合成之后，可以对其进行测序确认，筛选中真正符合要求的质粒。

将质粒大致调节至人类基因组的拷贝水平。

注：人类基因组的分子量:1.8*10^12, 1ng 约为3.3444*10^2copies,提取的量一般为:50-100ng/ul，若加入的量为5ul，则拷贝量约为8.36*10^4~1.67*10^5，而质粒一般达到10^10数量级（~100ug/ml）

由于质粒提取过程很容易产生气溶胶，造成污染，所以细菌培养、提取质粒的实验应该和进行PCR实验的区域最好有一定的隔离措施，防止相互污染。

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