改良盐析法提取人基因组DNA

材料准备：

1、1.5ml的eppendorf管(即EP管)

2、震荡仪

3、高速离心机

试剂准备：

1、TKM缓冲液

2、TRITON X100

3、10% SDS

4、5M的氯化钠溶液

5、蛋白酶K

6、无水乙醇

7、75%酒精

8、TE缓冲液

提取步骤：

（1）取500ul全血（EDTA抗凝），置于1.5ml eppendorf管中,加500μl TKM缓冲液后,再加约10μl TRITON X100,剧烈振荡混匀，放置2min，室温下离心2min（10000rpm）弃上清；

（2）加TKM缓冲液500μl，混匀后离心2min(10000rpm)弃上清；重复二次；

（3）加200μlTKM缓冲液混匀后再加15μl 10%SDS、3μl蛋白酶K，置55℃水浴30min；取出后加75μl5M Nacl，充分摇匀后快速离心10min（13000rpm）；

（4） 将上清液移入新的eppendorf管中，加入1ml无水乙醇沉淀DNA；

（5）片刻离心，弃上清，将沉淀DNA用75%酒精快洗2－3遍；

（6）室温干燥后加TE缓冲液50μl溶解DNA；

（7）－20℃冰箱保存

（8） -20℃冷藏的DNA样品使用前置于室温待融后混匀；且反复冻融不超过5次。

现在从血液提取人类基因组的方法很多（如离心柱法），也有商品化的试剂盒出售，但盐析法成本低廉，相对安全等优点，仍是一个不错的方法。

欢迎交流。

相关文章

  1、 TKM缓冲液、TE缓冲液配制方法

  2、 10%SDS缓冲液、Tris缓冲液配制方法

  3、 核酸电泳常用缓冲液配制方法